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单相琼脂扩散试验

   2013-07-12 实验室资讯网289
核心提示:原理一种定量试验,将一定量的抗体混合于琼脂内,倾注于玻片上,凝固后,在琼脂层上打孔,再将抗原加入孔中,使其向四周扩散。抗
原理一种定量试验,将一定量的抗体混合于琼脂内,倾注于玻片上,凝固后,在琼脂层上打孔,再将抗原加入孔中,使其向四周扩散。抗原抗体复合物形成的沉淀环直径与抗原的浓度成正比。如事先用不同浓度的标准抗原制成标准曲线,则未知标本中的抗原含量即可从标准曲线中求出。本试验主要用于检查标本中各种免疫球蛋白和血清IgG含量。
 
材料 
1.抗体:羊抗人IgG单价抗血清。
2.抗原:待检血清。
3.3%生理盐水琼脂、生理盐水、载玻片、直径3mm打孔器、小三角烧瓶、毛细滴管、湿盒。
 
方法 
1、制备含抗体的琼脂板
取羊抗人IgG单价抗血清一瓶(效价1:80),量取0.3ml于一小三角烧瓶中,加生理盐水11.7ml(40倍稀释混匀,置56℃水浴 中恒温2~3分钟)。
取3%生理盐水琼脂一管,隔水加热使溶,然后置56℃水浴 中,待琼脂温度降至56℃时,立即加入等量1:40稀释抗血清,迅速轻轻混匀,勿使产生气泡,迅速倾入载玻片上,每片3.5ml,待凝固后打孔。如下图所示。
  
2、稀释待检血清
将待检血清用生理盐水作40倍稀释,
3、打孔、加样
每份检样加两孔,加满(但不要溢出),加样时毛细滴管尖端不要划破琼脂。
4、温育
将琼脂板置搪瓷盒,垫湿纱布或海绵以防干燥,37℃恒温箱 24h。
 
结果观察与分析 
测量并求出每份检样两孔的沉淀环平均直径,按照标准曲线求出IgG含量。




 
标签: 单相琼脂扩散
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